雞傳染性支氣管炎抗體檢測試劑盒使用說明書

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【用途】
用來檢測雞血清中的禽傳染性支氣管炎病毒（IBV）抗體

【試驗原理】
臨床上，傳染性支氣管炎是一種急性、高度傳染的病毒性疾病，任何日齡的雞都可以感染。IBV的潛伏期為24-72小時。疾病侵害雞的呼吸系統和泌尿系統。青年雞表現為急性呼吸道癥狀及氣管損傷。死亡率可高達100%。血清中的病毒抗體可通過酶聯免疫的方法檢測。血清中的IBV抗體水平及整個雞群的免疫狀況可用ELISA方法進行監測。
將滅活的抗原包被在微孔板上，加入稀釋后的血清并孵育，血清中的抗IBV抗體將與包被在微孔板上的IBV結合，形成IBV抗原-抗體復合物。然后洗掉未結合的物質，加堿性磷酸酶標記的抗雞IgG的酶標結合物至微孔板中，酶標物將與IBV抗原-抗體復合物結合。孵育后洗掉未結合的結合物，然后加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶反應并生成一種黃色的產物，zui后終止反應，將顏色固定。顏色的深淺可用酶標儀（405-410nm）測定。

【一個微孔板所需的試劑的量】

Sp ×（100）＝ ELISA Unit （EU）              陽性對照值設為100 EU

【結果判定及EU單位說明】
IBV ELISA 值                          說明
小于10EUs                            IBV抗體為陰性
10-15 EUs                             IBV抗體為弱陽性，應被認為經過免疫或暴露于IBV，油乳狀疫苗也可能引起非特異性低水平抗體。
15-75 EUs                             IBV抗體適度陽性
＞75 EUs                              IBV抗體強陽性

【操作步驟】
1. 將試劑回溫至室溫，通過顛倒和渦旋將試劑混勻。
2. 將1份4×樣品稀釋液加入到含3份去離子水的容器中，充分混勻，例如，30ml 4×樣品稀釋液加入到90ml去離子水中。
3. 將1份20×洗滌液加入到含19份去離子水的容器中，充分混勻，例如，25ml 20×洗滌液加入到475ml去離子水中。
4. 稀釋前將陽性對照、陰性對照和樣品震蕩均勻。
5. 陽性對照、陰性對照和樣品均需要用樣品稀釋液稀釋后使用。稀釋比例為2μl ：800μl。將移液器調到100μl，反復吹打4次使之充分混勻。
6. 將稀釋后的陰性對照、陽性對照分別加入微孔中，每種做兩個平行，每孔100μl；將稀釋后的樣品100μl分別加入孔中，室溫下靜置30分鐘。
7. 棄去微孔板中溶液，每孔加入300μl洗滌液洗滌，重復洗滌2次，在洗滌過程中防止酶標板變干。
8. 每孔立即加入100μl結合物，室溫靜置30分鐘。
9. 重復步驟7進行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物，室溫靜置30分鐘。
11. 不要倒掉板內液體，每孔立即加入100μl終止液。
12. 用酶標儀雙波讀數（405nm或410nm作為主要波長，630nm或650nm為參考波長），計算結果。

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什么是雞傳染性支氣管炎？

雞傳染性支氣管炎是由傳染性支氣管炎病毒引起的雞的一種急性高度接觸性呼吸道傳染病。其臨診特征是呼吸困難、發出羅音、咳嗽、張口呼吸、打噴嚏。如果病原不是腎病變型毒株或不發生并發病，死亡率一般很低。產蛋雞感染通常變現產蛋量降低，蛋的品質下降。本病廣泛流行于世界各地，是養雞業的重要疫病。