諾如病毒膠體金檢測試紙

廣州健侖生物科技有限公司

諾如病毒，又稱諾瓦克病毒是人類杯狀病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中諾如病毒（Norovirus,NV）屬的一種病毒。是一組形態相似、抗原性略有不同的病毒顆粒。

諾如病毒感染性腹瀉在*范圍內均有流行，全年均可發生感染，感染對象主要是成人和學齡兒童，寒冷季節呈現高發。美國每年在所有的非細菌性腹瀉暴發中，60-90%是由諾如病毒引起。荷蘭、英國、日本、澳大利亞等發達國家也都有類似結果。在中國5歲以下腹瀉兒童中，諾如病毒檢出率為15%左右，血清抗體水平調查表明中國人群中諾如病毒的感染亦十分普遍。

“諾如病毒”感染性腹瀉屬于自限性疾病，沒有疫苗和*藥物，公眾搞好個人衛生、食品衛生和飲水衛生是預防本病的關鍵，要養成勤洗手、不喝生水、生熟食物分開，避免交叉污染等健康生活習慣。

潛伏期多在24～48h，zui短12h，zui長72h。感染者發病突然，主要癥狀為惡心、嘔吐、發熱、腹痛和腹瀉。兒童患者嘔吐普遍，成人患者腹瀉為多，24h內腹瀉4～8次，糞便為稀水便或水樣便，無粘液膿血。大便常規鏡檢WBC<15，未見RBC。原發感染患者的嘔吐癥狀明顯多于續發感染者，有些感染者僅表現出嘔吐癥狀。此外，也可見頭痛、寒顫和肌肉痛等癥狀，嚴重者可出現脫水癥狀。

【包裝規格】

20 測試/盒

【預期用途】

諾如病毒膠體金檢測試紙 用于體外診斷。諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）是用

免疫層析的方法快速定性

測定人糞便樣本中，基因1型（GGI）和基因2型（GGII）的諾如病毒。該試劑可以協助診斷胃腸

炎，分析有疑似諾如病毒胃腸炎癥狀的兒童和成人的糞便樣本。

【主要組成成分】

試劑盒內的試劑足夠進行20次檢測

測試卡 Cassette 20次檢測 內裝20個獨立包裝的測試卡

稀釋緩沖液 Diluent 30 ml 樣本稀釋緩沖液，氯化鈉蛋白緩沖液，含0.1% Kathon CG;

開瓶即用，藍色洗液 Wash 10ml 洗液，磷酸化的氯化鈉，含0.1% Thimerosal，開瓶即用

酶標記物1 Conjugate│1 7ml 穩定蛋白溶液中的生物素標記的抗諾如病毒抗體，開瓶即用，

酶標記物2 Conjugate│2 5ml 穩定蛋白溶液中的鏈霉菌過氧化物酶，開瓶即用

底物 Substrate 7ml */TMB，開瓶即用吸液管 Pipet 25支 每包中裝有25支有刻度標記的一次性塑料吸樣管

【儲存條件及有效期】

4-30°C保存，必須在有效期前使用。過有效期之后，產品的質量保證不再有效。同樣，如果檢測卡的外殼破損將會使檢測卡潮濕，我們將不能保證檢測卡適合使用。

有效期：6個月

【樣本要求】

糞便樣本必須使用沒有任何添加劑的干凈容器收集，試驗前儲存于溫度應為2-8 °C。在病人癥狀出現后（腹瀉和嘔吐），應盡快進行樣本采集，因為癥狀出現后1-3 天，病毒的清除達到zui大化。如果標本保存時間超過3 天，必須儲存于-20 °C。在實驗開始前，冷凍的樣本必須充分解凍，回復至室溫。與新鮮樣本一樣，復溫的樣本也必須在檢測前，和試劑充混合。應避免樣本多次凍融。

采用直腸拭子采集樣本時，必須得到足夠的糞便樣本（大約100 mg）以確保檢測進行。

【檢測方法】

1.常規信息

檢測前，樣本、稀釋緩沖液、試劑和檢測卡必須恢復至室溫（20 - 25 °C）。檢測卡必須在即將使用前才可以從外包裝中取出，檢測卡一旦從外包裝中取出或被使用，則不可以再次使用。檢測不可以在陽光直射下進行。

2.準備樣本懸濁液

取1 ml樣本稀釋緩沖液Diluent 加入貼好標簽的試管內。對于液態糞便樣本，可用盒內的一次性吸液管Pipet 吸取100 μl樣本（至吸液管的第二個增粗處），懸空滴加于事先已加入提取緩沖液的標記試管中；對于固態糞便樣本，取50-100mg樣本（豌豆大小）加入緩沖液中。樣本必須被混勻，可利用試管反復吸放，或者用漩渦混勻器將糞便懸浮液混勻。至少沉淀2分鐘后，取200- 500 μl上清液置于另一干凈試管中（或者未包被的微孔中）。

3.將檢測卡Cassette從外包裝中取出，將其放置在水平的墊子上。

4.用已經處理過同一樣本的一次性吸管，從糞便懸濁液中吸取250 μl上清液（*個標記處），

加入干凈的、標記的試管中。

5.在試管中加入6 滴酶標記物1 Conjugate│1（滴加時保持小瓶垂直）。

6.通過吸放的方式將混合液*混勻后，用一次性吸管將其全部吸出，以緩慢平穩連貫的水流，注入檢測卡的加樣孔中。將吸管傾斜約 45°}，管口指向反應窗，這樣混合物就可以全部流至反應窗內。__

7.將檢測卡在室溫下（20 - 25 °C）孵育10 分鐘。確保反應窗的檢測膜已被樣本混合液充分浸濕，否則請將100 μl 稀釋緩沖液滴入加樣孔中。

8.在反應窗中加入4 滴酶標記物2 Conjugate│2（滴加時保持小瓶垂直），再于室溫下孵育至少1分鐘。

9.在反應窗中，加入10滴洗液 Wash，待洗液被*吸收后，再進行后續操作。

10.在反應窗中加入6 滴底物 Substrate（滴加時保持小瓶垂直）。

11.之后的3分鐘內，讀出檢測結果。在3分鐘后出現的有色條帶，沒有診斷意義

【參考值（參考范圍）及檢驗結果的解釋】

1. 在加入底物后3 分鐘之內，在良好采光直視下讀出的檢測結果，是zui可靠的。

2. 查看在反應窗的“C”標記處，是否有出現藍色的條帶（所謂的內部質控線），在反應窗的“T”標記處是否出現藍色的條帶（所謂的檢測線）。顏色的強度可能會由淺變深。

3. 陽性結果：加入底物之后3 分鐘內，如果同時出現兩條藍色的條帶（檢測線“T”和質控線“C”），可判別為陽性結果。顏色可由淺變深。如果條帶只有部分清晰出現，也可以解釋為陽性。膜的其他顏色改變或其他部位的陰影，都不能解釋為陽性結果。

4. 陰性結果：加入底物的3 分鐘后，就可以開始判別是否為陰性結果或無效結果了。如果只在反應窗的質控帶“C”處出現藍色的條帶，在檢測帶“T”處沒有藍色條帶出現，則可判定為陰性結果。陰性結果說明，在樣本中沒有諾如病毒的抗原存在，或抗原的量低于檢測限。

5. 無效結果：在反應窗的檢測帶“T”和質控帶“C”處，均無藍色條帶出現，或者只在檢測帶

“T”出現條帶，這兩種情況均說明檢測無效，需要用新的檢測卡重新進行檢測。

諾如病毒抗原快速檢測卡（免疫層析法）檢測結果的解釋：

【注意事項】

1. 僅用于體外診斷。

2. 實驗必須由經過專業培訓的人員操作。必須嚴格按照醫學實驗室的規章制度操作。

3. 產品操作時必須嚴格按照說明書操作。

4. 樣品稀釋緩沖液中含有Kathon CG 作為防腐劑，此物質不能接觸皮膚或粘膜。

5. 樣本和試劑不可以用嘴吸取。

6. 樣本和試劑避免接觸受傷的皮膚或者粘膜。

7. 處理樣本時應該戴一次性手套，完成試驗后要洗手。

8. 禁止在樣本和試劑實驗區域內吸煙、吃東西或喝水。

9. 所有試劑和材料如果接觸有潛在感染性的樣本，應與樣本一樣，立即用適當的消毒劑（如：

次氯酸鈉）或者高壓高溫121℃至少1 小時處理。

10. 諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）必須在效期內使用。所有的試劑都被調整

為zui適宜的活性狀態。稀釋或改變這些試劑將減少其活性。如果不按照說明中的時

間和溫度進行操作，將會導致錯誤的結果。

11. 不同批號的諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）試劑盒中的試劑不可以混用。

12. 試劑和樣本必須避免微生物的污染，否則將會影響檢測結果。

13. 吸取每個樣本時，必須使用不同的吸管，以防止交叉污染及錯誤結果

14. 每個檢測卡只可使用一次

試劑盒組成

測試卡     Cassette      20次檢測   內裝20個獨立包裝的測試卡

稀釋緩沖液 Diluent       30 ml 樣本稀釋緩沖液，氯化鈉蛋白緩沖液，即用，含0.1% Kathon CG;開瓶即用，藍色

洗液      Wash          10ml 洗液，磷酸化的氯化鈉，含0.1% Thimerosal，開瓶即用

酶標記物1 Conjugate│1   7ml 穩定蛋白溶液中的生物素標記的抗諾如病毒抗體，開瓶即用，藍色

酶標記物2 Conjugate│2   5ml 穩定蛋白溶液中的鏈霉菌過氧化物酶，開瓶即用

底物       Substrate    7ml */TMB，開瓶即用

吸液管     Pipet         25支每包中裝有25支有刻度標記的一次性塑料吸樣管

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【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司

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提取時，將無菌磁珠和糞便同時放入離心管震蕩2次，每次30s，震蕩間歇置于冰上孵化2min。zui后用Nanodrop進DNA濃度檢測。
2.    DNA測序
每個樣品構建一個文庫，插入片段為350bp，測序策略：Illumina GAIIx、HiSeq 2000，PE100。
3.    DNA組裝和基因集構建
（1）DNA組裝：去除接頭等低質量reads和宿主基因組DNA數據，得到平均每個樣品6.13Gb，共1758 Gb細菌質量數據。73.7%的reads被組裝成3200萬個contigs，每個contigs長度均超過500個堿基，總的contig長度為45.7 GB。
（2）基因集構建：GeneMark用來預測每個樣品contigs的開放性閱讀框（ORFs）；分別與人和小鼠進行一一比對，發現豬的腸道基因集整體平均ORF長度和組裝的N50 contig長度較短。利用BLAT對所有樣品基因進行成對比較構建非冗余基因集；基于NCBI-NR數據庫通過CARMA3對基因進行分類；基于eggnog和KEGG數據庫進行基因功能注釋。
4.    數據分析方法
（1）分類分析：屬、門、種水平的物種分類、MGS分析、KEGG功能基因分析、耐藥基因分析。利用Bray-Curtis距離定義樣品之間的差異，并通過二維非度量多維尺度法（NMDS）進行可視化。
（2）豐度計算：基于 fitZig函數中的zero-inflated細菌斯混合模型進行豐度計算。通過計算Spearman相關系數獲得參與檸檬酸循環的耐藥基因和酶的相關性。 為鑒定豬腸道宏基因組的性別差異，本文分別對來自兩個不同農場相同品種的兩組豬（*組：11頭公豬，14頭母豬；第二組：10頭被閹割的公豬，10頭母豬。兩組豬飲食方式相同）進行分析，利用iPath2.0將公豬和母豬之間的差異基因或酶注釋到KEGG代謝通路中。
（2）NR數據庫比對得到的微生物基因和MGS（matagenomic species）

Extraction, the sterile beads and faeces into the centrifuge tube shock 2 times, each time 30s, shaking intermittently placed on ice incubation 2min. Finally use Nanodrop into the DNA concentration test.
DNA sequencing
A library was constructed for each sample with a 350 bp insert, sequencing strategy: Illumina GAIIx, HiSeq 2000, PE100.
3. DNA assembly and gene set construction
(1) DNA assembly: Low-quality reads and host genomic DNA data, such as linker, were removed to give an average of 6.13 Gb per sample for 1758 Gb of bacterial mass data. 73.7% of reads were assembled into 32 million contigs, each with contigs longer than 500 bases and a total contig of 45.7 GB.
(2) Construction of Gene Set: GeneMark was used to predict the open reading frames (ORFs) of contigs of each sample. One-to-one comparison with human and mouse respectively revealed that the overall average ORF length of the intestine gene sets in pigs and the N50 contig shorter length. Non-redundant gene sets were constructed by pairwise comparison of all sample genes using BLAT; genes were classified by CARMA3 based on the NCBI-NR database; and gene function annotations were based on eggnog and KEGG databases.
4 data analysis methods
(1) Classification analysis: Species classification of genera, genus, species, MGS analysis, KEGG functional gene analysis and drug resistance gene analysis. Differences between samples were defined using the Bray-Curtis distance and visualized by two-dimensional non-metric multidimensional scaling (NMDS).
(2) Abundance calculation: Abundance calculation is based on the zero-inflated mixture of bacteria and bacteria in fitZig function. Correlation between resistance genes involved in citric acid cycle and enzymes was obtained by calculating Spearman's correlation coefficient. To identify the gender differences in porcine gut macrogenomes, two groups of pigs of the same breed from two different farms (group 1: 11 boars, 14 sows; group 2: 10 castrated boars , 10 sows, two groups of pigs eating the same way) were analyzed using iPath 2.0 to annotate the differential genes or enzymes between the boar and sow into the KEGG metabolic pathway.
(2) Comparison of the NR database with the obtained microbial gene and MGS (matagenomic species)