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己烯雌酚類的殘留檢測試劑盒使用說明書

廣 州 健 侖 生 物 科 技 有 限 公 司

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己烯雌酚類的殘留檢測試劑盒使用說明書

 1 原理及用途

己烯雌酚是甾類同化激素，被大量用于促進反芻動物的生長。但由于己烯雌酚存在明顯的致癌性，歐美等發達國家已相繼禁止或嚴格禁止使用。我國農業部第235號文件中規定，動物源性食品中己烯雌酚的殘留*為不得檢出。

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織樣本中的己烯雌酚（Diethylstilbestrol，DES），試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標準品或樣品溶液，樣本中的己烯雌酚和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗己烯雌酚抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含己烯雌酚含量成負相關，與標準曲線比較即可得出樣本中己烯雌酚的殘留量。

2 技術指標

2.1 試劑盒靈敏度：0.05ppb(ng/ml)  

2.2 反應模式：25℃，30min～30min～15min

2.3 檢測下限：

組織（蝦、魚）………………………0.2ppb

豬肉/肝、雞肉/肝……………………0.5ppb

2.4 交叉反應率：

己烯雌酚………………………………100%

雙烯雌酚………………………………38.5%

己烷雌酚………………………………8.5%

己炔雌二醇……………………………<0.1%

雌三醇…………………………………<0.1%

 2.5 樣本回收率：

組     織   ……………………… 85%±10%

3 試劑盒組成

酶標板……………………………96孔

標準品：各1ml

0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb

高標準液：100ppb…………………1ml

酶標記物（紅蓋）…………………11ml

抗體工作液（藍蓋）………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

說明書………………………………1份

5.3.1 組織（雞、鴨、豬肉/豬肝、蝦、魚)樣本處理方法 

1）稱取2±0.05g勻漿后的樣本，加入6ml乙腈-丙酮混合液，振蕩2min，15℃4000r/min離心10min；

2）取3ml上清液，60℃氮氣/空氣吹干；

3）加入0.5ml（三氯甲烷），振蕩20s，加入2ml 2M NaOH，振蕩30s，4000r/min離心5min；

4）取上清液1ml，加入200µl 6M H₃PO₄，振蕩5s；

5）加入3ml乙腈萃取，振蕩2min，室溫4000r/min離心10min，取1.5ml上層有機相，60℃氮氣/空氣吹干；

6）不同樣本按如下方法復溶：

A）蝦魚：用1ml 40%甲醇溶液溶解干燥的殘留物，振蕩混勻30s。取50ul用于檢測。

    樣本稀釋倍數：4   檢測下限：0.2ppb

B）豬肉/肝、雞肉/肝：用2.5ml 40%甲醇溶液溶解干燥的殘留物，振蕩混勻30s。取50ul用于檢測。

    樣本稀釋倍數：10    檢測下限：0.5ppb

    以標準液百分吸光率為縱坐標，對應的標準液濃度（ppb）的對數為橫坐標，繪制標準液的半對數曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中待測物的實際濃度。

    若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。

8 注意事項

8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導致所有標準的OD值偏低。

8.2 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

8.3 混合要均勻，洗板要*，在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的*性。

8.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。

8.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

8.6 顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質。

8.7 反應終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。

9 貯藏及保存期

儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，避免冷凍。

保 質 期：該產品有效期為1年，生產日期見包裝盒。

  本公司的服務宗旨是“為民健康、誠信經營”。期望本公司能竭誠為你服務
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