一步法RT-PCR試劑盒 

一步法RT-PCR試劑盒包含Omniscript逆轉錄酶和Sensiscript逆轉錄酶的混合物、HotStarTaq DNA Polymerase、QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer、dNTP混合液和Q-Solution。Q-Solution是一種新型的輔助劑，有助于實現“困難”模板（如：高GC含量的模板）的高效擴增。簡單的單管反應體系構建和優化的試劑盒組分確保了結果成功且靈敏度高。

性能

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit提供方便的規格，可使用RNA模板進行高靈敏度和特異性的RT-PCR。試劑盒中包含優化的組分，可在同一反應混合液中進行逆轉錄和PCR擴增，完成"一步式"反應。*的酶組合和專門研發的反應緩沖液確保在一個管中進行高效、高特異性的逆轉錄和PCR，無需優化。試劑盒提供的新型的、雙陽離子PCR緩沖液確保在寬退火溫度范圍內得到高產量的特異性PCR產物。使用Q-Solution可提高不理想的RT-PCR的表現，這種*的輔助劑可幫助逆轉錄并高效擴增具有高GC含量和復雜二級結構的模板。

原理

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可對多種RNA模板進行簡單、靈敏的一步式RT-PCR。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有為逆轉錄和PCR反應特別設計的酶。*組合的Omniscript和Sensiscrip逆轉錄酶對RNA模板有高度親和性，確保RNA逆轉錄的靈敏度達到1 pg到2 µg。逆轉錄完成后，升溫至95°C，15分鐘，活化HotStarTaq DNA Polymerase同時使逆轉錄酶失活。這種方法可減少引物二聚體等非特異性擴增產物的生成，并減少背景的影響，確保RT-PCR的高靈敏度和可重復性。

退火溫度范圍寬

引物的退火溫度取決于堿基對的組成（如A、T、G、C核苷酸的比例）、引物的濃度和反應的離子環境。QIAGEN PCR Buffers含有K⁺和NH₄⁺，使用該緩沖液可在很寬的溫度范圍內增加特異性PCR產物的產量。其原理是破壞非特異性結合的引物對，提供更加可靠的反應環境，減少繁瑣的溫度優化過程。相反，如使用僅含K⁺的PCR或一步式RT-PCR緩沖液，PCR退火溫度的范圍較窄，可靠性較差。

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer專為提高逆轉錄和PCR擴增的效率而設計。該緩沖液含有新型輔助劑，可防止逆轉錄酶對PCR擴增的抑制，而這是一步式RT-PCR中常見的問題。該緩沖液確保在較大的溫度范圍和Mg²⁺濃度范圍內，引物與模板特異性結合，可對多種RNA模板進行高效的RT-PCR擴增。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution，這是可修飾核酸熔解行為的新型輔助劑。Q-Solution可促進高GC含量或含較多二級結構的模板的逆轉錄和擴增。 使用Q-Solution可簡化復雜模板RT-PCR的優化過程。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有您所需的所有試劑，可進行快速、簡便的RT-PCR，用于多種靈敏的應用（見表）。

操作流程

使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可快速、簡單的進行RT-PCR反應體系構建。無論是何種應用，即無論是病毒檢測、分子診斷研究還是基因表達，您只需將所有試劑在一個離心管中混合即可開始PCR擴增。反應混合液含有逆轉錄和PCR反應所需的所有試劑，無需添加其他試劑即可開始反應（參見下表）。

應用

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit適用于RT-PCR分析，包括：

• 病毒檢測
• 單細胞RT-PCR
• 基因表達分析

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