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利什曼原蟲AB抗體ELISA法診斷試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

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利什曼原蟲AB抗體ELISA法診斷試劑盒

試驗原理

間接法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知 LSM-Ab 濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將 LSM-Ab 和標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親

和素標記過的 HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物 A、B，和酶結合物同時作

用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中 LSM-Ab 的濃度呈比例關系。

自備材料

蒸餾水。

加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

避免直接接觸終止液和底物 A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項

試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物 A、B 液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

底物 A 應揮發，避免長時間打開蓋子。底物 B 對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實

驗完成后應立即讀取 OD 值。

加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g 離心 10 分鐘

將血清和紅細胞迅速小心地分離。

血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g 離心 30 分鐘去除顆粒。

細胞上清液---1000×g 離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血

脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在 37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并

確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水 50 倍稀釋。

操作步驟

使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤

差。

根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自

己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

加入稀釋好后的標準品 50ul 于反應孔、加入待測樣品 50ul 于反應孔內。立即加入 50ul 的標記的抗體。

蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 1 小時。

甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩 30 秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作 3 次。如果用洗板機

洗滌，洗滌次數增加一次。

每孔加入 80ul 的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 30 分鐘。

甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩 30 秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作 3 次。如果用洗板機

洗滌，洗滌次數增加一次。

每孔加入底物 A、B 各 50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 10 分鐘。避免光照。

取出酶標板，迅速加入 50ul 終止液，加入終止液后應立即測定結果。

在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

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利什曼原蟲抗體定性檢測試劑（黑熱病）

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