3. 取1號待檢血清30微升加入第1排第1孔，并將塑咀插入孔底，右手姆指輕壓彈簧1-2次混勻（避免產生過多的氣泡），從該孔取出30微升移入第2孔，混勻后取出30微升移入第3孔……直至第9孔混勻后取出30微升丟棄。此時第1排1-9孔待檢血清的稀釋度（稀釋倍數）依次為：1：2（1）1：4（2）1：8（3）1：16（4）1：32（5）1：64（6）1：128（7）1：256（8）1：512（9）。取2號待檢血清加入第2排：取3號待檢血清加入第3排……均按上法稀釋，注意！每取一份血清時，必須更換塑咀一個。

4. 在血凝板的第7排第1孔加陰性血清30微升、對倍稀釋至第3孔，混勻后從該孔取出30微升丟棄。此時陰性血清的稀釋倍數依次為1：2（1）1：4（2）1：8（3）。第5-6孔為稀釋液對照。

5. 在血凝板的第8排第l孔加陽性血清30微升，對倍稀釋至第12孔，混勻后從該孔取出30微升丟棄。此時陽性血清的稀釋倍數依次為1：2-1：4096。

6. 被檢血清各孔、陰性對照血清各孔、陽性對照各孔、稀釋液對照孔均各加血凝抗原（充分搖勻，瓶底應無血球沉淀）30微升。

7. 將血凝板置于微量振蕩器上振蕩1-2分鐘，如無振蕩器，用手輕輕搖勻亦可，然后將血凝板放在白紙上觀察各孔紅血球是否混勻，不出現血球沉淀為合格。蓋上玻板，37℃下靜置1-1.5小時或常溫下3小時左右判定結果，也可延至翌日判定。

結果判斷

1. 對照試驗：應在對照試驗結果有效的前提下，來判定待檢血清樣本的結果。

陰性對照血清1：8孔，稀釋液對照孔，均應無凝集（血球全部沉入孔底形成邊緣整齊的小圓點），或僅出現“+”凝集（血球大部沉于孔底，邊緣稍有少量血球懸浮）。

陽性血清對照1：2–l：256各孔應出現“++～++++”凝集為合格，（少量血球沉入孔底，大部血球懸浮于孔內）。

2. 待檢血清：以呈現“++”凝集的zui大稀釋倍數為該份血清的抗體效價。例如1號待檢血清l-5孔呈現“++ ～++++”凝集，6-7孔呈現“++”凝集，第8孔呈現“+”凝集，第9孔無凝集，那么就可判定該份血清的口蹄疫抗體效價為1：128。

3. 抗體效價與抗感染的關系：接種口蹄疫疫苗的豬群免疫抗體效價達到1：128以上,牛群、羊群免疫抗體效價達到1：256以上為免疫合格。

注意事項

1.液體血凝抗原4-8℃保存（切勿凍結），有效期4個月；陰陽性對照血清；-15～-20℃保存，有效期1年。

2. 嚴重溶血或嚴重污染的血清樣品不宜檢測，以免發生非特異性反應。

3. 勿用90°和130°血凝扳，嚴禁使用一次性血凝板，以免誤判結果。

4. 本法可單獨檢測口蹄疫抗體水平，也可同步檢測口蹄疫免疫抗體水平，豬水泡病免疫抗體水平。

5. 用過的血凝板應及時在水下沖盡血球。再用蒸餾水或去離子水沖洗2次，甩干水份放37℃恒溫箱內干燥備用。檢測用具應煮沸消毒，37℃干燥備用。血凝板太臟，可浸泡在5％鹽酸液內，48小時撈出后清水沖凈。

6. 每次檢測只做一份陰性、陽性和稀釋液對照。

“-”表示*不凝集成0–10%血球凝集。

“+”表示10-25％血球凝集“+++”表示75%血球凝集。

“++”表示50%血球凝集“++++”表示90-100%血球凝集。

7. 用不同批次的血凝抗原檢測同一份血清時，應事先用陽性血清準確測定各批次血凝抗原的效價，取抗原效價相同或相近的血凝抗原檢測待檢血清抗體水平的結果是基本*的，如果血凝抗原效價差別很大用來檢測同一血清樣品，肯定會出現檢測結果不*。

8. 收到本試劑盒時，應立即打開包裝，取出血凝抗原瓶，用力搖動，使粘附在瓶蓋上的紅細胞搖下，否則易出現沉渣，影響使用效果。

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